由于它操作技術(shù)簡(jiǎn)單,原材料成本低廉,生產(chǎn)周期較短以及人工場(chǎng)地要求簡(jiǎn)單的特點(diǎn),被不少生物界同仁認(rèn)為是未來(lái)五年海外生產(chǎn)向中國(guó)制造轉(zhuǎn)移又一潛力產(chǎn)業(yè).在過(guò)去的幾年中，國(guó)內(nèi)已經(jīng)涌現(xiàn)出數(shù)十家進(jìn)行大規(guī)模定制抗體的生產(chǎn)企業(yè),主要集中在江浙滬一帶.

????合成的多肽抗原由于分子較小,免疫到動(dòng)物體內(nèi)后很難產(chǎn)生免疫應(yīng)急反應(yīng),因此在免疫前通常要偶聯(lián)一個(gè)載體蛋白.常用的載體蛋白有血藍(lán)蛋白(KLH),牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA).根據(jù)載體蛋白側(cè)鏈氨基與多肽抗原上偶聯(lián)位置的不同,我們定義為以下三種:N端氨基偶聯(lián),C端羧基偶聯(lián)和Cys巰基偶聯(lián).

偶連的方式與偶連的活化劑和氨基酸組成有關(guān)。

通常有下列三種方法供選擇：

1．EDC:通過(guò)C端羧基連接，一般要求序列中無(wú)Glu(E)，Asp?(D)或一個(gè)酰胺化的C端

2．戊二醛通過(guò)N端的氨基偶連，要求序列中無(wú)Lys?(K)或N端沒(méi)有被乙?；?/p>

3．MBS:通過(guò)Cys的巰基基團(tuán)與載體上的氨基連接.如果序列中無(wú)Cys，可添加Cys或Mpa，最好增加在N端。

明皓生物提供以下藕連服務(wù)，分別用下列符號(hào)代表它們之間的組合：

MB01???????????????BSA-Peptide?N?terminus

MB02C????????????BSA-Peptide?C?terminus

MB02Cys?????????BSA-Peptide?Cys

MK01????????????????KLH-Peptide?N?terminus

MK02C?????????????KLH-Peptide?C?terminus

MK02Cys?????????KLH-Peptide?Cys

MO11???????????????OVA-Peptide?N?terminus

MO12C????????????OVA-Peptide?C?terminus

MO13Cys?????????OVA-Peptide?Cys

??????偶聯(lián)好的載體復(fù)合物經(jīng)過(guò)透析,再加入佐劑和進(jìn)行乳化,就可以進(jìn)行免疫了.經(jīng)過(guò)一免,二免和增強(qiáng)免疫后,6-8周左右可以看到一個(gè)具有一般效價(jià)的制備多抗.這時(shí)候再通過(guò)取血,離心取上清的方法得到抗性血清.有條件的單位還通常會(huì)用標(biāo)準(zhǔn)蛋白Protein?A/G進(jìn)行抗體純化,為了運(yùn)輸和儲(chǔ)存需要有時(shí)會(huì)進(jìn)行凍干處理.也有根據(jù)客戶的需要用免疫的抗原掛到親和層析柱上對(duì)抗體進(jìn)行純化,得到專一性更高的多克隆抗體.

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????單抗的制備要稍微復(fù)雜一些,時(shí)間跨度會(huì)更長(zhǎng),一個(gè)項(xiàng)目結(jié)束下來(lái)要半年左右的時(shí)間.

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