將激發(fā)光/漫散射光和特異性熒光區(qū)分開(kāi)的工具就是濾光片。濾光片廣泛存在于使用熒光的科研儀器中，比如熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀、RT-PCR等。在顯微鏡中，濾光片通常存在于一個(gè)小方盒子中，如果我們打開(kāi)這個(gè)盒子，會(huì)發(fā)現(xiàn)里面有三個(gè)不同的濾光片，其中兩個(gè)是圓的，一個(gè)是長(zhǎng)方形的。兩個(gè)圓形的，分別是激發(fā)光濾光片和發(fā)射光濾光片，那個(gè)長(zhǎng)方形的就是最重要的二向分色鏡片。

之所以說(shuō)二向分色鏡片最重要，是因?yàn)閷⒓ぐl(fā)光/漫散射光和熒光發(fā)射光區(qū)分開(kāi)就是二向分鏡片的功勞。

激發(fā)光濾光片負(fù)責(zé)篩選合適激發(fā)光波長(zhǎng)。比如將白光激發(fā)光篩選為藍(lán)光，用于激發(fā)GFP等熒光素。如果用的是單波長(zhǎng)的LED或者激光，激發(fā)光濾光片就不是必須的了。

發(fā)射光濾光片負(fù)責(zé)篩選需要的熒光發(fā)射光。當(dāng)一個(gè)波長(zhǎng)的激發(fā)光，能夠激發(fā)不同發(fā)射光時(shí)，這個(gè)濾光片就可以將不同的發(fā)射光區(qū)分，比如同樣可以用藍(lán)光激發(fā)的FITC和PE。另外，因?yàn)楹芏嗌飳W(xué)組織都有自發(fā)熒光，且自發(fā)熒光多處于紅光區(qū)域，利用發(fā)射光濾光片可以過(guò)濾掉自發(fā)熒光干擾。如果一個(gè)樣本只有一種熒光，而且沒(méi)有自發(fā)熒光干擾，這個(gè)濾光片也是可以省略的。

二向色鏡的作用是區(qū)分激發(fā)光和發(fā)射光，這個(gè)應(yīng)該是必須的了。但也有儀器是可選的。絕大多數(shù)光路設(shè)計(jì)，采用的是二向分色鏡，搭建方便，調(diào)節(jié)也方便。

那么問(wèn)題來(lái)了，我們應(yīng)該如何去選擇適合我們所需的濾光片呢？

首先，需要確定所使用熒光素的激發(fā)和發(fā)射光譜。我們可以通過(guò)幾個(gè)常用的網(wǎng)站，查詢(xún)熒光素的光譜。比如Thermo旗下的Invitrogen/Molecular Probe網(wǎng)站，有比較好用的熒光光譜查看器，如果是一些流式細(xì)胞分析用熒光素，可能需要到對(duì)應(yīng)的公司網(wǎng)站查詢(xún)。

得到熒光光譜信息后，我們就可以針對(duì)性的選擇所需的濾光片了。

我們可以將濾光片光譜與熒光素光譜重疊在一起，分析濾光片是否合適。

當(dāng)然，在選擇濾光片時(shí)，還需要考慮激光光源的光譜，特別是汞燈、金屬鹵素?zé)艉桶坠?span>LED，避免選擇光源發(fā)射較弱的區(qū)域。

深圳市飛宇達(dá)光電供應(yīng)或定制熒光成像系統(tǒng)光路中的三種濾光片：激發(fā)光濾光片，熒光發(fā)射光濾光片，二向分色鏡片，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。